[식품(산업)기사 작업형] <미생물> 일반세균 검사

세포의 배양방법은 배지의 상태에 따라 고체 배양과 액체배양으로 나눌 수 있는 데 일반세포 배양은 세포의 개체수 증가, 한 종류 미생물의 선별 및 순수 배양, 보유 중인 균주의 관리 등 목적을 가지고 있다. 

 

식품기사 실험 작업형 문제로 나오는 "일반세균 검사"

 

일반 세균을 측정하는 이유는??

식품의 제조, 가공, 운반, 저장 등의  과정이 위생적인지 판단할 수 있는 지표로 사용된다. 

 

일반 세균수만 측정하는 경우는 식품의 현재 오염정도/ 부패의 진행도를 알고 싶을 때 사용된다.

총균수를 측정하는 경우는 유제품 통조림 등 가열 살균한 제품에 대한 제조 원료의 위생상태, 위생적 취급의 여부를 알고자 할 때 

 

재료 및 기구

시료, 마이크로 피펫, 알코올 램프, 패트리 디쉬, 유리 시험관, 시약 스푼, 멸균수, PCA (plate caunt Agor)

 

 

1. 준비단계 

주변 소독을 위해서 알코올램프 켜 놓는다.   장갑을 끼고 있으면 70% 알코올 소독, 장갑을 끼지 않는다면 손을 70% 알코올로 소독)

 

2. 단계별 희석 

증류수 측정 

(1) 원액이 들어있는 시험관과 빈 시험관 4개를 준비 (총 5개) → 증류수를 멸균처리 한 피펫을 이용해 빈 4개의 시험관에 9ml씩 넣는다. 

 

★ 화염멸균 처리(시작과 끝 부분에)

시험관 입구를 화염 멸균 처리한다. ( 알코올램프 위에서 살짝 멸균처리)  

화염 멸균 처리한 피펫으로 9mL 증류수를 취하고 → 빈 시험관 입구를 화염 멸균 처리한다. → 증류수를 빈 시험관에 넣어 → 다시 입구를 화염멸균 처리를 한다. 

시료가 잘 섞이게 도와준다. 

(2) 원액이 들어있는 시험관을 잘 섞일 수 있도록 도와준다. (vortexer 이용 - 시료를 잘 섞이게 도와주는 기계) 

 

계열희석법 진행 

(3) 1번 시험관에 피펫을 이용해 원액 1mL를 취해 시험관에 넣는다.  ★화염 멸균법 중요 

<원액 1ml 취하는 방법>

마이크로피펫을 용량에 맞게 눈금을 맞춘다. → 마이크로피펫에 일회용 tip을 부착한다. → 원액 시험관 입구를 화염멸균 처리한다. → 마이크로피펫으로 1ml 취한다. → 1번 시험관에 넣는다. →  1번 시험관을 잘 섞는다. (vortexer 기계 이용) 

 

(4) 1번 시험관에서 1mL 취하고 2번 시험관에 넣는다. 

<하는 방법>

1번 시험관을 화염멸균 후 → 마이크로피펫으로 1ml 취한다. → 2번 시험관에 넣는다. → 잘 섞는다. (vortexer 기계 이용)

 

(5) 위와 같은 순서로 2번 시험관에서 1mL 취하고 3번 시험관에 넣는다.

(6) 위와 같은 순서로 3번 시험관에서 1mL 취하고 4번 시험관에 넣는다. 

 

이렇게 하는 이유는?

colony를 셀 경우, 30~300개 정도가 적당하기 때문에 그 정도의 개수가 어디에서 나올지 모르니깐! 희석해서 사용한다. 

원액에서 4번 시험관까지 갈수록 색이 점점 연해진다. (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000) 

 

배양하기

(1) petri dish 8개 를 준비한다. ( 공시료, 10배, 100배, 1000배, 10000배 ) 1개의 시험관 당 2개씩 사용한다. 

 

(2) 시험관에서 마이크로 피펫으로 1mL를 취해 petri dish를 살짝 열어서 가운 데 떨어뜨린다. 

★화염 멸균이 중요하다. 알코올램프 근처에서 작업형 실험을 진행한다.

 

(3) 각 시험관마다 petri dish에 작업을 한다. 

 

(4) 멸균처리 한 미리 식혀 놓은 (45~50℃) agar 배지를 부어서 식힌다.  

 

<순서> agar 배지 시험관 입구를 화염 멸균 처리한다. →  petri dish를 살짝 열어서 15~20ml 넣는다. → petri dish 뚜껑을 닫아서 돌리면서 섞는다.  → 30~1시간 굳힌다. 

 

(5) 배양기에 petri dish를 뒤집어서 (굳은 면이 위쪽)으로 해서 넣는다. 

 

 

배양기에 넣은 모습

결과

colony를 셀 경우, 30~300개가 적당하다.  집락의 숫자가 30개 이하 거나 300개 이상인 것은 통계적으로 신빙성이 없기 때문에 30~300개 정도의 집락이 있는 것만 고른다. 

 

같은 집락을 두 번 반복하여 세는 것을 방지하기 위해 분획선을 그어 상단부터 센다. 

 

예를 들어 1:100으로 희석한 petri dish 에 77개의 집락이 관찰되었을 경우 77x100 = 7,700/g 

※ CFU/mL : Colony Forming Unit/ 1mL 1mL당 Colony의 개수